ELISA試劑盒總需求時刻來保溫，是因為ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發作。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標本，其間的抗原并不是都有對等的和固相抗結合的機會，只需zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的進程，因而需經松散才華抵達反響的完畢。
保溫的辦法除有的ELISA試劑盒儀器附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中，ELISA板底應貼著水面，使溫度活絡平衡。為避免蒸騰，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此刻可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA試劑盒應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱性超卓的資料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui終將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規則的溫度，特別是在氣溫較低的時分更應如此。
在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響，即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反響的完畢需求有必定的溫度和時刻，這一保溫進程稱為溫育，有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當。
無論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能活絡平衡。室溫溫育的反響，操作時的室溫應嚴峻束縛在規則的范圍內，規范室溫溫度是指20～25℃，但具體操作時可根據說明書的要求控制溫育。室溫溫育時，ELISA試劑盒只需平置于操作臺上即可。應留神溫育的溫度和時刻應按規則力求準確。為確保這一點，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板一同測定。
