一抗的選擇
一般說來，在運(yùn)用偶聯(lián)二抗結(jié)合無偶聯(lián)物的一抗時(shí)，一抗宿主動物的物種選擇較為重要，關(guān)于免疫組化而言，盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而防止二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)，例如：檢測小鼠樣本蛋白，則不該選擇小鼠或大鼠源的一抗，選兔源的一抗，則二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測分子的抗兔 IgG。
假設(shè)選擇有偶聯(lián)物的一抗則不適用上述情況，除免疫組化外的其它對不含內(nèi)源性免疫球蛋白樣本的檢測辦法，則抗體宿主物種的影響不大，如對不含 IgG 的細(xì)胞裂解物樣本的 western blotting 檢測，盡管如此，含有血清的組織裂解物和組織培育上清中含有免疫球蛋白，復(fù)原變性樣本中含IgG，在western blot 檢測中則結(jié)合出現(xiàn) IgG 分子50 and 25 kDa 的重鏈和輕鏈條帶。
二抗的選擇
二抗應(yīng)選用與運(yùn)用的一抗相同的物種來歷，例如：假設(shè)你的一抗是小鼠的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗 anti-mouse secondary 。主張查看二抗說明書保證該抗體適用于你的檢測運(yùn)用， 二抗一般銜接熒光素 FITC 或發(fā)光團(tuán)。
兩層染色抗體的選擇
兩層染色抗體的選擇用未偶聯(lián)一抗進(jìn)行細(xì)胞培育物或組織切片的兩層免疫染色要求一抗來歷于不同物種而且二抗別離辨認(rèn)其中之一，二抗說明書應(yīng)描繪其與其它物種來歷的免疫球蛋有否有交叉吸附。
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